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这一天继续未完成的sds page
上一次我们把cast cells做好了
接下来就学load sample和marker
首先将整个electrophoresis tank里的distilled water倒掉
(收cast cells的方法:把cast cells放进electrophoresis tank用distilled water装满然后放进冰箱里)
然后倒入electrophoresis buffer
完毕后就拆掉comb
然后用shringe试一下看看well有没有塞着
接着就开始load sample
这个很考功夫
然后是load marker
更考功夫
因为volume很小而且很贵
只要有什么差错就会浪费掉
完毕后检查一下electrophoresis buffer有没有覆盖cast cells
就可以开始run electrophoresis了
(V=100v voltan越高越快完成,可是成果没有那么好)
当所有的颜色都消失后
electrophoresis就完成了
首先把electrophoresis buffer倒掉
然后打开cast cells把gel拿出来
放在一个container里用distilled water冲洗
接着就是staining
把staining buffer倒进container里
然后shake个半小时
整片gel就会蓝蓝的
staining结束后
就是destaining
这个过程需要五到六个小时
也就是说需要overnight
destaining完成后
我们就可以看到band了
当然gel要放进一个plastic bag里
然后seal起来
志豪有告诉我们说
run sds page是一种才能
可以放进resume里
而且外面公司run一片gel给的价钱是rm300!
挺优渥的待遇
不过请记得
这个gel是carcinogen的
成分多的话会致癌
所以我们做的时候都会戴手套
上个星期我们做的bradford assay失败了
拿到的standard curve怪怪的
regression离1太远了
所以今天重做
上一次我们把cast cells做好了
接下来就学load sample和marker
首先将整个electrophoresis tank里的distilled water倒掉
(收cast cells的方法:把cast cells放进electrophoresis tank用distilled water装满然后放进冰箱里)
然后倒入electrophoresis buffer
完毕后就拆掉comb
然后用shringe试一下看看well有没有塞着
接着就开始load sample
这个很考功夫
然后是load marker
更考功夫
因为volume很小而且很贵
只要有什么差错就会浪费掉
完毕后检查一下electrophoresis buffer有没有覆盖cast cells
就可以开始run electrophoresis了
(V=100v voltan越高越快完成,可是成果没有那么好)
当所有的颜色都消失后
electrophoresis就完成了
首先把electrophoresis buffer倒掉
然后打开cast cells把gel拿出来
放在一个container里用distilled water冲洗
接着就是staining
把staining buffer倒进container里
然后shake个半小时
整片gel就会蓝蓝的
staining结束后
就是destaining
这个过程需要五到六个小时
也就是说需要overnight
destaining完成后
我们就可以看到band了
当然gel要放进一个plastic bag里
然后seal起来
志豪有告诉我们说
run sds page是一种才能
可以放进resume里
而且外面公司run一片gel给的价钱是rm300!
挺优渥的待遇
不过请记得
这个gel是carcinogen的
成分多的话会致癌
所以我们做的时候都会戴手套
上个星期我们做的bradford assay失败了
拿到的standard curve怪怪的
regression离1太远了
所以今天重做
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